成纤维细胞滤泡性淋巴瘤的B区

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Fibroblasts:TheB’skneesoffollicularlymphoma（成纤维细胞：滤泡性淋巴瘤的B区）

成纤维细胞是淋巴结的免疫建筑师。在本期《免疫》杂志中，Mourcin等人描述了人类扁桃体成纤维细胞景观，并预测了T细胞和B细胞的相互作用。滤泡性淋巴瘤的转录组学改变可能提供尚未开发的临床靶点。

成纤维细胞是淋巴结微环境的基本组成部分。使用小鼠模型的研究表明，成纤维细胞直接支持淋巴细胞的迁移、定位和次级淋巴器官内的相互作用。成纤维细胞通过产生CCL19、CCL21、CXCL12、CXCL13、白细胞介素-7（IL-7）和B细胞激活因子（BAFF）等因子，形成支持T细胞和B细胞区隔化和存活的特殊亚群。对人类这一生态位的探索主要局限于体外共培养和组织成像，在某些情况下识别人类和小鼠之间的差异。在本期《免疫》杂志中，Mourcin等人（年）提供了人类淋巴成纤维细胞的转录组学和功能性解剖，将三个主要亚群与其小鼠对应物相匹配，并探索非恶性扁桃体和滤泡性淋巴瘤（FL）中T和B细胞功能的可能作用。他们进一步定义了人类淋巴成纤维细胞在恶性B细胞存活中的支持作用。

作者利用人类扁桃体探索成纤维细胞的异质性。CD49a（ITGA1）、波多普兰（PDPN）和CD21被用作流式细胞术的标记物，以分化三个主要亚群，它们与定义的小鼠亚群相关：成纤维细胞网状细胞（FRC:PDPN+CD21CD49a+）、滤泡树突状细胞（FDC:PDPN+CD21+CD49a）和双阴性（DN:PDPN-CD21CD49a+）血管周围细胞（图1），CD49a被鉴定为FRC和DNs的新标记物。单细胞qPCR产生了区分每个亚群的精确基质表达数据，而基于群体的RNA测序（RNA-seq）提供了更全面的基因表达谱。第四个亚群（PDPN+CD49a）不能归类为免疫特异性亚型，除作为其他亚群的对照外，未进一步检查。它的身份将是未来研究的一个有趣话题。

图1人类淋巴结中的成纤维细胞亚群：表型、功能和滤泡性淋巴瘤（FL）

表型和转录组学的影响Mourcin等人（年）的数据定义了扁桃体和FL中人类淋巴成纤维细胞的三个主要亚群。双阴性（DN）血管周围成纤维细胞显示出前体潜能，与肿瘤坏死因子（TNF）和淋巴毒素（LT）的共培养导致周细胞标记物的下调和成纤维细胞网状细胞（FRC）特征性标记物的上调。在滤泡性淋巴瘤中，成纤维细胞富含TNF、LT和TGFb反应基因，DN成纤维细胞再次暴露于这些因子导致FLFRC特征因子的上调。扁桃体FRC在共培养中显示出支持幼稚淋巴细胞存活的能力，并且所确定的总体子集可能含有进一步的高度特化的FRC亚群，这些亚群尚待定义。FLFRCs能够选择性地支持FL-B细胞的存活。FL-B细胞和FL-FRC表达相互作用的表型。滤泡树突状细胞（FDC）表现出特征性的FDC基因特征，在FL微环境中明显缺失或严重破坏，原因不明。FL-B细胞表现出与CD21间质细胞（FRC，DNs）的表型允许播散和丰富的相互作用。第四个可培养基质亚群CD49PDPN+已确定，但尚未确定。这些结果表明，FLB细胞和FL成纤维细胞之间的关键相互作用推动了恶性FL微环境的创建和维持。

DN亚群的免疫荧光染色显示原位血管周围定位。在小鼠中，血管周围网状细胞具有前体功能，在LNs、脾脏和Peyers斑块中产生FRC亚群。在这里，作者在DN细胞和具有发育潜能的骨髓间充质干细胞之间建立了联系，表明DN表达巢蛋白，并且在体外可以表达脂肪细胞和成骨细胞的标记物。FL患者的LN基质表现出肿瘤坏死因子（TNF）和淋巴毒素（LT）的特征。这些细胞因子的治疗促使DNs增加FRC特征性粘附分子（ICAM1和VCAM1）和淋巴细胞调节因子（CCL19、CCL21和IL7）的表达，同时减少周细胞标记物（CSPG4和RGS5）。总之，这些数据表明人类DNs可能类似于小鼠血管周围网状细胞。与其他基质亚群相比，DNs的独特功能具有未来的意义。

接下来，对FRC进行了表征。人类FRC信号包括特征性趋化因子和淋巴细胞生长因子（IL7、BAFF、CCL19、CCL21和CXCL13），以及细胞外基质和导管成分。在已公布的小鼠数据的转录组覆盖中，人类FRC转录组与包含七个小鼠FRC簇的细胞特异性对齐。组织学检查发现LN卵泡周围有CXCL13+FRC。与单独培养基或对照PDPN+CD49a细胞相比，与IL-7和BAFF表达一致，FRC在共培养实验中增加了原始CD4+T和B细胞的存活率。

最后，作者探讨了假定的FDC子集。众所周知，FDC很难分离和培养，最近才通过策略性地使用基因报告小鼠（Pikor等人，年）实现了详细的转录组学表征。Mourcin等人（年）产生的基因表达谱与FDC一致，包括与抗原呈递和与生发中心B细胞和T卵泡辅助细胞的串扰相关的基因。作者认为FOXP4可能是细胞长期存活的调节因子，同时也是Bcl-2家族成员的一致模式。CXCL13hiCXCL12lo表型使人联想到小鼠生发中心光区FDC，但未探讨主要亚群内的异质性。未来的单细胞分析可以进一步深入了解这种异质性。

对非恶性扁桃体成纤维细胞数据和已发表的FLB细胞数据进行的串扰分析以及验证共培养研究表明，FRC对FL-B细胞具有促生存支持作用。然而，恶性肿瘤的存在影响基质转录组，因此作者从FL生成RNA-seq数据，对FRC、DN和FDC亚群进行分类，以便与非恶性亚群进行直接比较，并预测FL成纤维细胞和FL-B细胞之间的串扰通路（图1）。FL成纤维细胞增加了其特征性FRC分子（如CCR7配体）的表达，这些分子在癌症和炎症中通常减少。研究之间存在太多差异，无法推测生物学原因，包括物种（人类与小鼠）、疾病（淋巴瘤、慢性感染、自身免疫、实体瘤转移）和进展动力学（人类数月/年，小鼠数天/周），但随着以人类成纤维细胞为中心的疾病的数据不断涌现，这将是一件有趣的事情。

基因表达特征和共培养实验表明，转化生长因子b（TGF-b）、TNF和LT介导的FRC和FL-b细胞之间的串扰可提高FL-b细胞的存活率、致病性基质表型以及FL-b细胞和恶性b细胞滤泡的扩散。总的来说，这促进了FL支持性微环境的形成，该微环境可用于治疗。因此，FL活检数据显示CCL19表达增加，与TGFB1和LTB呈正相关。

FL-B细胞基因特征表明对生发中心的限制减少（S1PR2和P2RY8减少，S1PR1增加）。此外，从组织学上看，16%的FL组织中完全没有CD21+FDC网络，另有47%的FL组织中CD21+FDC网络被破坏，这表明FDC（如本文所定义）可能不促进FRC中FL-B细胞的存活。然而，CD21+FDCs的缺失是否定义了基质的真正缺失，或存在未定义或进一步分化的亚群，仍有待探讨。Mourcin等人（年）报告，他们的体外人类细胞共培养结果与体外转录组的预测结果相匹配，并预测了类似小鼠亚群在白细胞支持和分化能力方面的已知功能。虽然小鼠系统提供了有用的机制数据，但这项工作为使用体外和共培养方法提供了强有力的实际支持，以获得支持小鼠数据和病理状态（如癌症、自身免疫、纤维化、慢性和反复病毒感染）的新人类见解，病理学的长期发展与小鼠模型不同。

有趣的是，这里确定的三个广泛的亚群是否可以进一步分化为专家亚群，如在具有九个已确定亚群的小鼠中，其中八个亚群对应于特定的微环境生态位。人类PDPN+CD49a亚群的身份尚不明确，但值得注意的是，与单独培养基相比，这些细胞为T细胞和B细胞存活（FL和非恶性生发中心B细胞）提供了重要支持。在进行的体外功能研究中，有兴趣了解所有三个可培养的亚群（FRC、DN和PDPN+CD49a）在直接比较中的表现，与来自比较表达数据的预测相比，对照DN对照物探索FRC生物学，反之亦然。

Mourcin等人（年）支持并扩展了肿瘤改变次级淋巴器官中FRC的发现。通过合并新的和已发表的数据集，他们得出了关于人类次级淋巴器官成纤维细胞生物学的推论。一个悬而未决的问题是，FL的这些发现是否适用于其他恶性肿瘤，尤其是经常转移到LNs的上皮癌。FRCs和癌相关成纤维细胞（CAFs）之间的区别常常模糊不清，因为两者都是激活的成纤维细胞，即使在没有转移的情况下，它们也有某些相似性和标记物。本文的数据支持FRC和LN-CAF之间的发展关系。区分是重要的，因为成纤维细胞的治疗靶向必须考虑对支配次级淋巴器官免疫应答的更广泛基础结构的细胞的影响。

成纤维细胞生物学正处于一场表征革命中，转录组学技术剖析了它们对许多条件的贡献。下一步是将这些特性结合在一起，为驱动成纤维细胞介导的病理学（包括转移性癌症的传播）的共享和不同过程创建一个连贯的图像和靶向策略。特别是对于FL，更好地了解其致病微环境不仅可以确定新的临床靶点，而且可能有助于发现残留疾病、缓解和复发的特征和生物标志物。