流式告诉你,5岁内儿童为什么这么容易受E

时间:2019-1-3 19:26:54 来源:扁桃体恶性淋巴瘤

腭扁桃体是位于口咽部的二次淋巴器官,对口腔病原体的防御至关重要。腭扁桃体随着年龄大小会发生变化,在3至5岁之间的儿童中最大,随后逐渐减小。作为二次淋巴器官,腭扁桃体也是B细胞发育的最后阶段的部位,其涉及过渡性B细胞的运输、抗原暴露、亲和力成熟和体细胞超突变。B细胞是腭扁桃体的主要细胞成分,占上皮下淋巴细胞的50-90%。B细胞及其终末分化形式——浆细胞是体液免疫的关键细胞类型。口腔扁桃体的物理位置使免疫细胞与口腔内的病原体紧密接触,并使扁桃体在口腔病原体的免疫防御中起重要作用。

除了它们在口腔病原体保护中的作用外,扁桃体也是一些口腔病原体的感染部位。一种发病率和死亡率很高的口腔病原体是爱泼斯坦巴尔病毒(EBV)。EBV相关疾病最常见的表现是传染性单核细胞增多症,这是发达国家未接触过EBV的青少年很常见的自限性发热性疾病。EBV也与赤道非洲最常见的儿科恶性肿瘤之一伯基特淋巴瘤密切相关。赤道非洲的儿童在生命早期经常感染EBV,较早的感染年龄与Burkitt淋巴瘤的风险增加相关。

在初次感染期间,EBV通过其受体CD21感染扁桃体中初始B细胞。虽然EBV可以体外感染所有B细胞类型,但初始B细胞更容易永生化成增殖性淋巴母细胞,是病毒感染的优先对象。

在临床上,外周血淋巴细胞和其它白细胞计数,是反映整体免疫系统功能的指标。已有充分的证据表明,外周血淋巴细胞随年龄和性别而不同,但是这些差异是否也存在于幼儿的二级淋巴组织的淋巴细胞,尚不太清楚。使用双色流式细胞仪的一项早期研究发现了扁桃体B细胞标记随年龄增长而变化,但当时无法确定具体的B细胞亚群。从那时起,越来越多的研究开始检测成年人、青少年和大龄儿童腭扁桃体中不同B细胞亚群的比例,但尚无研究检测4岁前儿童扁桃体B细胞亚群的变化。1~5岁对于理解腭扁桃体的独特免疫系统是至关重要的,而且是腭扁桃体发挥其在口腔病原体防御作用最重要的年龄范围。

美国的Wohlford等人为此进行了研究,结果发表在年9月9日的《CytometryBClinCytom》上,回答了下述三个问题:

首先,1-5岁之间的幼儿扁桃体组织中B细胞亚群的参考范围是多少?

其次,这些孩子B细胞亚型与年龄、性别、EBV感染有何不同?

第三,在5岁内幼儿,B细胞表达CD21、EBV受体的模式是什么样的?

方案分析的细胞群体及其表型特征

Tr——过渡B细胞;MN——初始B细胞;NSM——未转换记忆B;CM——经典记忆B;AM——非典型记忆B、GC——生发中心B;PC——浆细胞。

设门分析步骤从左到右,从上到下逐图解析:

1、FSC/SSC散点图,选择淋巴细胞群体。

2、通过FSC-H/FSC-W排除粘连体。

3、通过SSC-H/SSC-W再次排除粘连体。

4、通过Live/Dead染料,排除掉死细胞。

5、选择CD19+CD3-的B细胞。

6、B细胞中,根据CD38/CD24表达强度不同,主要分为:

(1)过渡B细胞——CD38hi、CD24hi;(2)成熟B细胞——CD24+、CD38-;(3)生发中心B细胞——CD38+、CD24-;(4)浆细胞——CD38hi、CD24-、CD27hi。

7、在CD24+、CD38-的成熟B细胞中,通过IgD与CD27将其分为4群:初始B(IgD+、CD27-)、未转换记忆B(IgD+、CD27+)、经典记忆B(IgD-、CD27+)和非典型记忆B(IgD-、CD27-)。

8、在CD38+、CD24-的生发中心B细胞中,根据CXCR4分为2群:CXCR4+的中心母细胞和CXCR4-的中心细胞。

接着,分选出不同B细胞群,检测其EBV载量。

结果

1、初始B是5岁内儿童扁桃体B细胞最主要的组成部分,约占扁桃体总B细胞的40%。详细亚群分布见下表:

2、初始B细胞随着年龄增长而降低,非典型记忆B和经典记忆B则逐渐增高,这与抗原暴露增多有关。

3、5岁内儿童约60%存在EB病毒感染,EBV病毒载量比之前报道的要高(3.2×10E6/10E6个扁桃体单个核细胞)。从分选后的细胞看,EB病毒主要存在于记忆B亚群中,这与EB病毒初次感染时对象为初始B细胞、之后由记忆B细胞携带的理论模型是一致的。

4、扁桃体B细胞亚群中CD21的表达水平不同,初始B表达强度最高,由于CD21是EV病毒结合的受体,所以5岁内大量的初始B,为EB病毒感染提供了良好的入侵途径。

大自然创造了人类这个神奇的生物,然而却同时也给人类创造了很多挑战。这是为什么?

参考文献:WohlfordEM,BareselPC,WilmoreJR,MortellitiAJ,ColemanCB,RochfordR.ChangesintonsilBcellphenotypesandEBVreceptorexpressioninchildrenunder5yearsold.CytometryBClinCytom.Sep8.doi:10./cyto.b..

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